pcr終點法

所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號累積實時監測整個PCR程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光訊號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個迴圈擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。

PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應迴圈數的增加，DNA聚合酶的失活，dNTP和引物的枯竭，反映副產物焦磷酸對合成反應的阻害等原因，最終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統的PCR中，常用凝膠電泳分離並用熒光染色來檢測PCR反應的最終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。