熒光偏振原理

熒光偏振工作原理：

將磷酸化底物進行熒光標記，蛋白激酶產生的磷酸化產物不進行熒光標記。讓兩種磷酸化產物與抗絲氨酸抗體（絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點，因為其結構末端含有羥基，羥基很活潑，可以與磷酸基團結合）相競爭結合。

當反應液中沒有蛋白激酶產生的磷酸化產物時，熒光標記的磷酸化物與抗體相結合形成複合體，由於複合體較大，運動速率相對較小，受偏振光激發後產生的激發光具有較大的偏振值當反應液中含有蛋白激酶產生的磷酸化產物時，因二者競爭抗體的結合位點，結合到抗體上的熒光標記物較少，遊離的熒光標記物在反應液中很多，發出的激發光偏振值減小。

當蛋白激酶的活性越強，產生的磷酸化產物也就越多，與熒光標記物的競爭越激烈，對標記物產生的激發光的性質影響越大，因此偏振的改變直接與蛋白激酶的活性相關。利用這一原理可以檢測蛋白激酶活性。