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pcr條帶結果怎麼看

pcr條帶結果怎麼看

實時熒光定量PCR技術是在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最後透過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

基線在PCR擴增反應的最初數個循環裏,熒光信號變化不大,接近一條直線,這樣的直線即基線。

光域值threshold的設定,一般將PCR反應前15個循環的熒光信號作爲熒光本底信號,熒光域值是PCR3-15個循環熒光信號標準差的10倍,熒光域值設定在PCR擴增的指數期。

CT值表示每個PCR反應管內熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。

研究表明,各模板的CT值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關係,起始拷貝數越多,CT值越小,反之亦然。

融解曲線是用來驗證擴增產物特異性的,如果產物是單一條帶,融解曲線就會出現一尖峯如果有引物二聚體或其它非特異性擴增,就會出現至少兩個尖峯。

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