牛奶封闭液配制方法

1、封闭液的选用要求

1）常用封闭液为脱脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、无蛋白封闭液等

2) 封闭液浓度：封闭时一般用5%脱脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%无蛋白封闭液配制二抗稀释液一般为1-5%脱脂牛奶，全部用PBS稀释

3) 封闭时间：室温1-2h、4度过夜或37度半小时

4) 封闭液pH：一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右，而1%脱脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的WB-Protocol中要求封闭液和稀释抗体的封闭液需要调pH至7.4但是大多数抗体不调pH也可以做出来

5) 个人经验：5%脱脂牛奶封闭效果最佳，但有时也可能封闭过度，可以与BSA或无蛋白封闭液轮流更换

推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100mL）。

很多人的经验是：脱脂牛奶封闭后背景比较干净，而检测磷酸化蛋白则用BSA（因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白，会干扰的）