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石蜡去染色的方法

石蜡去染色的方法

1、首先取下组织,投入预先配好的固定液福尔马林中,使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

2、固定成功后,修剪,用水洗去多余固定液,然后放入不同浓度的酒精脱水,一般用由低浓度到高浓度酒精依次浸泡,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精。

3、将已经已经融化好的石蜡倒入脱水透明后的组织中,放入溶蜡箱中保温一段时间,待石蜡液完全渗入组织块中,在用石蜡液包埋(石蜡液的体积最好大于组织体积的10倍),冷却凝固成块,以便实验中切片。

4、切片、展片、烤片:将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。

5、染色:脱蜡——水化——染色——脱水——透明——封片——观察

使用二甲苯脱蜡,然后再使用从低到高浓度的酒精进行水化,以便染料可以进入组织。

使用苏木精染料进行染色,流水稍洗去染料,再用0.1%盐酸乙醇进行分化,然后水洗去多余染料。

伊红液染色,,染色完成后用流水洗去多余染料。

水洗完染料后用从低到高浓度的酒精进行醇洗以及脱水。

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